Figlio di un ex Maggior generale della U.S. Army, John Cameron Mitchell cresce nel rigore delle basi militari statunitensi tra Germania e Scozia. Dopo gli studi presso l'Università di Northwestern, nella seconda metà degli anni Ottanta, inizia a calcare i palcoscenici di Broadway, trovando ingaggio in numerosi musical di successo.
Dopo qualche passaggio televisivo negli episodi di alcune serie tv di successo (MacGyver, Freddy's Nightmares, Law & Order - I due volti della giustizia), ottiene una parte nella commedia Girl 6 di Spike Lee.
Nel 2001 debutta alla regia con Hedwig - La diva con qualcosa in più, nel quale dà anima e corpo al personaggio di Hansel-Hedwig, un cantante transgender della Germania dell'Est alla disperata ricerca del successo e dell'amore. Il film, tratto dall'omonimo musical ideato da Mitchell, gli vale una candidatura per la migliore interpretazione ai Golden Globe e numerosi riconoscimenti al Sundance Film Festival, al Festival di Deauville e a Berlino.
Nel 2006 dirige l'audace e provocatorio Shortbus - Dove tutto è permesso, nel quale filma le tragicomiche peripezie erotiche e sentimentali di sette ragazzi newyorkesi. Con la regia di Rabbit Hole adatta per il grande schermo l'omonima pièce teatrale di David Lindsay-Abaire, e offre a Nicole Kidman un nuovo tormentato ruolo, quello di una madre annientata dal dolore per la perdita di un figlio.
Produttore esecutivo di Tarnation, un documentario a metà tra il filmato amatoriale e la fiction, Mitchell dirige inoltre numerosi videoclip musicali.
2002 Candidatura Migliore attore protagonista (commedia o musical) per Hedwig - La diva con qualcosa in più
2011 Candidatura Miglior regista per Rabbit Hole
2001 Premio Migliore opera prima - Open Palm Award per Hedwig - La diva con qualcosa in più
2010 Regia
2006 Regia, Sceneggiatura, Soggetto
2001 Recitazione, Regia, Sceneggiatura, Soggetto
2017 Regia, Sceneggiatura, Produzione
Sarà John Cameron Mitchell a interpretare nel film Ron il ruolo che era stato affidato a Leslie Jordan, purtroppo morto prima delle riprese.
La serie Joe vs. Carole, sulla storia di Joe Exotic e Carole Baskin, ha ora un trailer che mostra le prime scene con star John Cameron Mitchell e Kate McKinnon.
Baci appassionati per John Cameron Mitchell, impegnato sul set di Joe Exotic nei panni dell'amante dei felini reso celebre dalla docuserie Netflix Tiger King.
John Cameron Mitchell interpreterà Joe Exotic nella serie biografica NBCUniversal, l'attore affiancherà Kate McKinnon che sarà Carole Baskin.
Il progetto è diretto dal regista John Cameron Mitchell e tra i protagonisti c'è anche Nicole Kidman.